PROPOSTA DE AULAS PRÁTICAS

Proposta para  aula prática
a) Coleta do sêmen
Uma dica!
Importante
b) Avaliação do sêmen
c) Avaliação estimada da motilidade espermática

Tipo A - espermatozoides móveis com progressão rápida.

Tipo B - espermatozoides móveis com progressão lenta.

Tipo C - espermatozoides móveis, porém sem progressão.

Tipo D - espermatozoides imóveis.

Normal: > 50% do tipo A e B
Anormal: < 50% do tipo A e B
d) Vigor
e) Observação da morfologia espermática
f) Como corar os espermatozoides?

O primeiro passo para realização desta prática é conseguir o material para análise. Isso pode ser feito de várias formas, em função da espécie escolhida (pesquise em livros da área e na internet). Porém o método mais simples e menos traumático para coleta do sêmen é a masturbação.

Nossa sugestão é que você consiga alguns voluntários para coleta do sêmen humano e/ou de animais. Como exemplo, você pode procurar uma clínica veterinária na sua cidade e pedir para que eles coletem sêmen de cão, gato, galo etc.

No caso optar pela coleta de sêmen humano, tente fazer isto discretamente, sem chamar muito a atenção da turma, pois escolher alunos para realizar a coleta pode ser constrangedor e inclusive causar problemas legais.

Outra possibilidade muito interessante é descongelar amostras de sêmen bovino, caso seja cedido por algum fazendeiro que utiliza a prática de inseminação artificial. Neste caso, pode-se ilustrar vários temas relativos às biotecnologias da reprodução. O inconveniente disso é que o botijão onde as amostras ficam armazenadas em nitrogênio líquido precisa ser transportado até o laboratório da escola. Caso não seja possível o transporte do botijão de nitrogênio, você pode encher uma garrafa térmica comum de café com o nitrogênio líquido e colocar as doses de sêmen dentro dela para transporte até a escola (dura cerca de 2 a 3 horas).

A garrafa térmica não pode ser totalmente fechada, pois, com a expansão do nitrogênio, pode explodir. Lembre-se também de que o nitrogênio líquido está a -196°C, ou seja, pode causar queimaduras sérias por frio, se houver contato com a pele humana por mais de alguns segundos.

O nitrogênio líquido também desperta a curiosidade e criatividade dos alunos. O professor pode aproveitar a oportunidade para abordar temas referentes aos fenômenos físicos envolvidos.

No caso da análise do sêmen congelado em nitrogênio líquido, as doses precisam ser descongeladas em banho-maria na temperatura de 38ºC por 60 segundos para serem avaliadas em seguida.

O ideal é que o sêmen seja coletado ou descongelado no momento da prática, para que amostras tenham sêmen vivo durante a aula. 

O processo de avaliação da amostra de sêmen deve começar com a observação dos aspectos físicos mais simples, como volume, aspecto, odor, coloração e medida de pH.

Um passo importante é pedir que os alunos observem e anotem cada um dos itens em todas as amostras de sêmen coletadas (o ideal é que haja de 3 a 5 amostras diferentes de sêmen, se possível, de diferentes espécies ou indivíduos).

A motilidade é realizada colocando-se uma gota do sêmen entre lâmina e lamínula previamente aquecidas e vistas em microscopia óptica no aumento de 200 ou 400 vezes, em que se fará uma avaliação subjetiva do percentual de espermatozoides com movimentação retilínea progressiva (o resultado deve variar de 0 a 100%). Essa avaliação depende bastante da experiência do técnico observador, mas apresenta alta correlação com a fertilidade, além de ser muito prática e ágil.

A motilidade dos espermatozoides humanos será classificada segundo os padrões da Organização Mundial de Saúde (OMS, 1992):

Finalmente, a amostra de sêmen será considerada normal ou anormal segundo o critério:

A vigor é a medida da intensidade e da força de movimentação do espermatozoide, pontuadas de 0 a 5 pontos, sendo a intensidade máxima a passagem rápida e vigorosa do espermatozoide pelo campo de visualização do microscópio.

A morfologia é realizada através da coloração, em microscópio de contraste de fase ou ainda em lâminas coradas no aumento de 1.000 vezes. No caso da coloração, a avaliação é executada após a análise de dois esfregaços de sêmen fresco. Um mínimo de 200 espermatozoides é estudado no aumento de 1.000 vezes. Quanto aos aspectos morfológicos, os espermatozoides são classificados em dois grupos:

A - Normal: a cabeça será levemente ovalada, única, lisa, sem gotas citoplasmáticas e com o acrossoma ocupando cerca de 40% a 70% da cabeça. O diâmetro varia de 3 a 5µm, podendo apresentar até 2 vacúolos citoplasmáticos. A peça intermediária deve medir de 6 a 10µm, alinhar-se com o eixo longitudinal da cabeça e não apresentar expansões laterais. A cauda deve ser única e desenrolada.

B - Anormal: No caso de espermatozoides anormais, as classificações variam de acordo com as espécies; para a espécie humana, a classificação mais comum é:

1. Defeitos no acrossoma:

·         Acrossoma pequeno;

·         Acrossoma grande.

2. Defeitos do corpo e peça intermediária:

·         Peça intermediária larga;

·          Gota intracitoplasmática;

·         Peça intermediária separada.

3. Defeitos estruturais:

·         Piriforme;

·         Achatado;

·         Forma de ampulheta;

·         Superfície irregular;

·         Mais que dois vacúolos;

·         Achatado no sítio de implantação da cauda;

·         Não ovalada de um lado;

·         Redonda.

4. Defeitos da cauda:

·         Inserção;

·         Espiralada;

·         Ângulo > 90 graus. 

Diferentes corantes podem ser utilizados para visualização dos espermatozoides. Veja a seguir os procedimentos de preparo e uso de alguns dos corantes mais utilizados e de fácil preparo.

Coloração de Giemsa (ótima para visualização do acrossoma):

·         Fazer o esfregaço delgado com o sêmen fresco e secar ao ar (Figura 1).

·         Colocar álcool metílico não diluído sobre a lâmina.

·         Deixar descansar por 10 minutos.

·         Drenar e secar ao ar.

·         Cobrir a lâmina com corante de Giemsa (17 gotas da solução-estoque de Giemsa em água destilada suficiente para tornar um volume final de 5mL).

·         Deixar descansar por 20 minutos.

·         Lavar com água destilada.